LABORATORIO DI BIOTECNOLOGIE III
| A.A. | CFU |
|---|---|
| 2007/2008 | 8 |
| Docente | Ricevimento studenti | |
|---|---|---|
| Sabrina Dominici |
Assegnato al Corso di Studio
| Giorno | Orario | Aula |
|---|
Obiettivi Formativi
Il corso ha la finalità di fornire agli studenti le conoscenze teoriche, necessarie alla caratterizzazione biochimica ed immunologica di una proteina/antigene. Grazie all’attività pratica lo studente potrà inoltre acquisire buona padronanza delle più comuni tecniche di laboratorio a tale scopo impiegate.
Programma
1. Purificazione di una proteina d?interesse da una miscela complessa di molecole
1.1 Preparazione degli estratti cellulari;
1.2 Cromatografia: principi, limitazioni ed applicazioni: Cromatografia liquida ad alta risoluzione (HPLC), Cromatografia di gel filtrazione, Cromatografia d?affinit?, Cromatografia a scambio ionico
1.3 Solubilit? differenziale: salting-in e salting-out
1.4 Precipitazione isoelettrica
2 Caratterizzazione biochimica di una proteina
2.1 Elettroforesi: principi, limitazioni ed applicazioni : Elettroforesi su gel di poliacrilammide con sodio dodecilsolfato (SDS-PAGE), Elettroforesi in condizioni native, Gel in gradiente, Elettroforesi bidimensionale (2D-PAGE), Rivelazione, quantificazione/stima e recupero di una proteina da gel, Elettroeluizione
2.2 Sequenziamento automatico N-terminale
2.3 Determinazione dello stato redox di una proteina: Effetti dello stato redox sulla struttura e funzionalit? di una proteina, Metodi di valutazione dei gruppi sulfidrili liberi presenti in una proteina: dosaggi spettrofotometrici e mediante utilizzo di marcatori radioattivi, Identificazione dei disolfuri presenti in una proteina: spettrometria di massa
3. Purezza di un antigene
3.1 Endotossine batteriche: TEST LAL metodiche qualitative e quantitative
3.2 Metodi per la rimozione di contaminanti endotossinici da campioni
4. Caratterizzazione immunochimica di una proteina ad uso vaccinale
4.1 Produzione di anticorpi: Risposta immunitaria, studio di adeguati protocolli di immunizzazione, Anticorpi policlonali, Anticorpi monoclinali, anticorpi ricombinanti e ingenierizzazione di anticorpi
5 Purificazione e frammentazione di immunoglobuline
6 Marcatura di anticorpi: Marcatura con isotopi radioattivi, Marcatura con composti fluorescenti, Biotinilazione, Coniugazione a complessi enzimatici.
7 Avidit? / affinit? di anticorpi
8 Immunoprecipitazione
9 Dosaggi Immunologici
9.1 Western blotting e immunoblotting
9.2 Test ELISA semplice, sandwich, competitivo.
9.3 ELISA IgG isotype ed ELISPOT per la valutazione della tipologia della risposta immune Th1/Th 2
10 Sviluppo di un kit diagnostico basato su tecniche ELISA
11 Cenni di citofluorimetria
Modalità Didattiche, Obblighi, Testi di Studio e Modalità di Accertamento
- Modalità didattiche
- Lezione frontale; laboratorio
- Testi di studio
- Keith Wilson e John Walker ?Biochimica e biologia molecolare? Raffaello Cortina Editore Gregory A. Petsko Damgar Ringe ?Struttura e funzione delle proteine? Zanichelli Daan J.A. Crommelin Robert D. Sindelar ? Biotecnologie Farmaceutiche? Zanichelli
- Modalità di
accertamento - Esame orale
- Disabilità e DSA
Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.
A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.
| « torna indietro | Ultimo aggiornamento: 06/07/2007 |
