Il corso fornisce le nozioni di base relativve ai metodi di indagine biochimica e guida lo studente alla comprensione delle loro possibili applicazioni nonché delle specifiche opportunità offerte da un singolo metodo rispetto agli altri, nella raccolta dei dati sperimentali.

Il processo scientifico. Il metodo ipotetico deduttivo, rapporto fra scienza e tecnica, ricaduta sulla societ? delle scoperte scientifiche e della tecnologia. Il codice etico delle ricerche biomediche. Studi in vivo ed ex-vivo. Modificazione della dieta, somministrazione di farmaci, animali transgenici e knoch out, condizionamento e trapianto di cellule ed organi. Preparazione di organi, tessuti e cellule. Organi perfusi e fettine di tessuto, disgregazione del tessuto e semina delle cellule da tessuti normali e tumorali. Separazione di cellule:gradiente di densit? a gravit? 1, con centrifugazione su fradiente continuo e isopicnico. Omogenati cellulari. Omogenizzazione con potter, ultraturrax e sonicazione. Uso di tamponi specifici, con antiproteolitici, composti riducenti o stabilizzanti. Destromizzazione, separazione degli urganuli cellulari con centrifugazione differenziale. Studio degli enzimi. Misura dell?attivit? enzimatica. Metodi spettrofotometrici, fluorimetrici, radiochimici. Cinetica enzimatica: calcolo della Km, Ki, Ka. Studio del tipo di inibizione: competitiva, non competitiva, incompetitiva. Tipizzazione dell?enzima con analoghi dei substrati, curva di pH e della temperatura. Studio delle proteine. Quantificazione delle proteine: assorbanza a 280 e 260 nm, metodo del Biureto, di Lowry, di Bradford. Purificazione di proteine con cromatografia convenzionale: gel filtrazione, cromatografia, scambio ionico, di affinit?, di immunoaffinit?, ad interazioni idrofobiche, a fase inversa. Analisi delle struttura primaria: con degradazione di Edman. Analisi cristallografica. Elettroforesi Elettroforesi su gel di poliacrilammide in condizioni native o denaturanti (SDS-PAGE), rivelazione e analisi densitometrica delle bande, determinazione del peso molecolare, elettroforesi su gradiente, elettroforesi preparativa, isoelettrofocalizzazione, immunoblot. Elettroforesi bidimensionale. Elettroforesi capillare. Dosaggio dei metaboliti. Metodi di deproteinizzazione, dosaggi con metodi spettrofotometrici, fluorimetrici, radiochimici. Spettroscopia infrarosso, NMR, EPR, spettrometria di Massa. Cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) in fase inversa e diretta. Tecniche immunologiche Produzione di anticorpi policlonali e monoclonali. Purificazione di anticorpi, verifica della immunoreattivit?, curve di immunotitolazione, applicazioni immunoistochimiche e citochimiche, sistemi ELISA, amplificazione del segnale nella reazione antigene-anticorpo.

Modalità didattiche

lezione frontale e laboratorio

Testi di studio

Wilson K, Walker JM ? Metodologia biochimica- Raffaello Cortina Editore 2003 Reed, Holmes, Weyers, ecc. ?Metodologie di base per le scienze biomolecolari?, Zanichelli, BO, 2004

Modalità di
accertamento

esame orale e scritto

Disabilità e DSA

Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.

A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.

Per gli studenti del Corso di Laurea in Scienze e Tecnologie per la Natura, 'Metodologie biochimiche' viene mutuato per 6 CFU dall'insegnamento di 'Biochimica' del CdL in Scienze Biologiche.